產(chǎn)品介紹：

　本試劑盒適用于從多種植物中提取RNA，即便是從多糖多酚含量豐富的植物中也能成功提取高質(zhì)量的RNA，如水稻葉片、小麥葉片、玉米葉片、煙草葉、松針、銀杏葉、楊樹葉、石榴葉、冬青葉、蘋果、桃、梨、西紅柿、櫻桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圓果皮、桂圓果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆等樣本。*的裂解液配方，可使細(xì)胞中的RNA酶迅速滅活，有效去除多糖多酚對(duì)RNA提取的影響，無(wú)需氯仿等試劑，同時(shí)采用硅基質(zhì)膜吸附RNA進(jìn)行純化，提取的總RNA純度高，無(wú)基因組、蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì)的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和體外翻譯等多種下游實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 植物RNA提取試劑盒 （DNase I)

產(chǎn)品貨號(hào)：CW2598S

產(chǎn)品組份：

操作步驟:

1．勻漿處理：取50-100mg植物組織在液氮中迅速研磨成粉末，加入500 μl Buffer RLS（使用前請(qǐng)先檢查是否加入β-巰基乙醇），立即渦旋劇烈震蕩混勻。

2．4°C 12,000 rpm（~13,400×g）離心2分鐘。

3．將上清液轉(zhuǎn)入已裝入收集管的過濾柱（Spin Columns FS）中，4°C 12,000 rpm離心1分鐘，小心吸取收集管中的上清并轉(zhuǎn)移至新的RNase-Free 離心管（自備）中，槍頭盡量避免接觸收集管中的細(xì)胞碎片沉淀。

4．緩慢加入0.5倍上清體積的無(wú)水乙醇，混勻（此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀），將得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns RM）中，若一次不能將全部溶液加入吸附柱中，請(qǐng)分兩次轉(zhuǎn)入。4°C 12,000 rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

5．向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1，4°C 12,000 rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6．配制DNase I 混合液：取52 μl RNase-Free Water，向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer和20 μl DNase I（1 U/μl），混勻， 配制成終體積為80 μl的反應(yīng)液。

7．向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分鐘。

8．向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1，4°C 12,000 rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．向吸附柱RM中加入500 μl Buffer RW2（使用前檢查是否加入無(wú)水乙醇）, 4°C 12,000 rpm離心1 分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

10．重復(fù)步驟9。

11．4°C 12,000 rpm離心2分鐘。

12．將吸附柱RM裝入新的RNase-Free Centrifuge Tubes（1.5 ml）中，向吸附膜的中間部位懸空滴加30-50 μl RNase-Free Water，室溫放置2分鐘，4°C 12,000 rpm離心1分鐘，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。

相關(guān)知識(shí)：

從不同細(xì)胞中分離提取高純度、高質(zhì)量的RNA對(duì)于很多分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要，如cDNA的合成、Northern印記分析、mRNA差別顯示技術(shù)分離基因以及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)，很大程度上取決于RNA的完整性。然而由于RNA自身結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，以及周圍環(huán)境中眾多而又穩(wěn)定存在的RNA酶，常常會(huì)使得RNA發(fā)生降解。在植物果實(shí)組織中，如玉米籽粒、柑橘、香蕉，含有豐富的多糖、蛋白，由于多糖與RNA在溶解性上高度一致，導(dǎo)致二者形成非常難溶的膠狀復(fù)合物，使得RNA提取量下降，并造成一定程度上的降解；在植物老化組織中，如玉米老葉、冬青葉、茶葉，含有大量的多酚，當(dāng)其氧化后，會(huì)使得RNA沉淀變成褐色，干擾了后續(xù)實(shí)驗(yàn)；有些產(chǎn)生次生代謝組織，如葡萄、蘋果、甘蔗，其次生產(chǎn)物會(huì)降低RNA的獲取率。

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

品牌             貨號(hào)                   名稱                                      規(guī)格

康為世紀(jì)   CW2598S  OminiPlant RNA Kit （Dnase I）     50preps

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 植物RNA提取試劑盒 （DNase I)

產(chǎn)品貨號(hào)：CW2598S

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