產(chǎn)品英文名：TAKARA RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)，F(xiàn)N CH-296

產(chǎn)品中文名：TAKARA RetroNectin®重組人纖維蛋白片段，F(xiàn)N CH-296

RetroNectin® 重組人纖維蛋白片段

RetroNectin^®是在大腸桿菌中產(chǎn)生的重組人纖維蛋白片段FN CH-296。 當(dāng)包被在培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板表面時，RetroNectin^®能顯著增強(qiáng)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移到哺乳動物細(xì)胞中。

RetroNectin^®重組人纖維蛋白片段和激發(fā)型CD3單抗可分別與T淋巴細(xì)胞上的VLA和TCR結(jié)合，兩者共同作用激活酪-氨酸激酶pp125FAK，通過Ras途徑刺激T細(xì)胞的增殖和分化，使其獲得上千倍的增殖。

組份

RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) 0.5 mg (Cat. #T100A)

RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) 2.5 mg (Cat. #T100B)

RetroNectin is provided as a sterile 1 mg/ml solution.

[Form]　Sterile solution containing 12.5 mM sodium citrate (pH 6.2) and 1.25% sucrose

儲存

-20℃

Caution: Freezing and thawing can be repeated up to 10 times

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訂購RetroNectin歡迎您咨詢華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司 。紅榮微再授權(quán)代理TAKARA CellArtis ，Rubicon產(chǎn)品。紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司以“傳遞科學(xué)價值，服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨，主營干細(xì)胞、精準(zhǔn)醫(yī)療、細(xì)胞治療、器官再生四大板塊的產(chǎn)品。

RetroNectin原理

RetroNectin是重組人纖維蛋白片段FN CH-296，包括細(xì)胞結(jié)合域，肝磷脂結(jié)合域和CS1位點三個功能區(qū)域。它由574個氨基酸組成，分子量63 kDa。RetroNectin能夠大幅地提高逆轉(zhuǎn)錄病毒感染哺乳動物細(xì)胞的感染效率，其作用原理是：細(xì)胞表面VLA-4及VLA-5可分別與RetroNectin上的CS-1位點及細(xì)胞結(jié)合域結(jié)合，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可以與肝磷脂結(jié)合域結(jié)合。在經(jīng)RetroNectin包被的培養(yǎng)容器表面，細(xì)胞與病毒載體以高濃度共存，從而提高基因轉(zhuǎn)染效率。RetroNectin^®重組人纖維蛋白片段和激發(fā)型CD3單抗可分別與T淋巴細(xì)胞上的VLA和TCR結(jié)合，兩者共同作用激活酪-氨-酸激酶pp125FAK，通過Ras途徑刺激T細(xì)胞的增殖和分化，使其獲得上千倍的增殖。

RetroNectin逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)操作流程

RetroNectin技術(shù)可以顯著提高逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)染效率，這一發(fā)現(xiàn)克服了向造血干細(xì)胞中導(dǎo)入基因的困難?，F(xiàn)在，RetroNectin技術(shù)已成為使用逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作的常規(guī)選擇，其操作流程大致如下：

1. 注射用水或滅菌蒸餾水充分溶解RetroNectin，調(diào)節(jié)濃度至1mg/ml。

2. 0.22 μm濾膜過濾RetroNectin溶液，分裝后-20 ℃保存。

3. 用緩沖液將RetroNectin溶液稀釋至20～100 μg/ml。

4. 將RetroNectin稀釋液加入24孔板，每孔0.5 ml (建議用PBS緩沖液稀釋RetroNectin后包被Non-Tissue Cluture Treated plate。

5. 室溫放置4小時或4 ℃，避光，過夜。

6. 吸出RetroNectin溶液，每孔加入PBS終止液0.5 ml。

7. 室溫放置30分鐘。

8. 加入適量PBS清洗孔板。

9. 吸出清洗液，得到RetroNectin包被的孔板 (如果暫不使用，可以在孔中加入適量PBS，用膠膜將平板蓋密封，避免RetroNectin干燥，可于4 ℃保存4周。使用前將PBS吸出) 。

10. 逆轉(zhuǎn)錄病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。

11. 將病毒液加入包被后的24孔板，每孔300 μl。

12. 32 ℃放置4小時。

13. 吸出病毒保存液。

14. 每孔加入待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞懸液400 μl (通常細(xì)胞濃度為1 × 105/ml) 。

RetroNectin增強(qiáng)T細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)流程

T-cell expansion protocol using RetroNectin reagent, GT-T551 T-cell medium, CultiLife bags, and anti-CD3 mAb.

1.  RetroNectin和CD3單克隆抗體包被培養(yǎng)袋。

2.  同時，來自PBMC的T細(xì)胞用GT-T551培養(yǎng)基+IL-2+血漿培養(yǎng)。

3. 第4天，T細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)袋，繼續(xù)用GT-T551培養(yǎng)基+IL-2+血漿培養(yǎng)。

4. 第7天，添加更多GT-T551培養(yǎng)基+IL-2。

5. 第10天，分裝兩個培養(yǎng)袋，添加更多GT-T551培養(yǎng)基+IL-2。

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